百螢 Cell Meter 活細(xì)胞Caspase 1結(jié)合檢測(cè)試劑盒 綠色熒光

一、百螢cell meter 活細(xì)胞caspase 1結(jié)合檢測(cè)試劑盒 綠色熒光概述
我們的cell meter 活細(xì)胞半胱天冬酶活性檢測(cè)試劑盒基于半胱天冬酶的熒光抑制劑。這些抑制劑具有細(xì)胞滲透性和非細(xì)胞毒性。一旦進(jìn)入細(xì)胞，半胱天冬酶與活性半胱天冬酶共價(jià)結(jié)合。caspase-1主要參與促炎細(xì)胞因子的細(xì)胞凋亡過程。已經(jīng)證明胱天蛋白酶1對(duì)肽序列tyr-val-ala-asp（yvad）具有底物選擇性。該試劑盒使用fam-yvad-fmk作為半胱天冬酶1活性的熒光指示劑。 fam-yvad-fmk在凋亡細(xì)胞中不可逆地結(jié)合活化的半胱天冬酶1。一旦與半胱天冬酶1結(jié)合，熒光試劑保留在細(xì)胞內(nèi)。結(jié)合抑制胱天蛋白酶1但不會(huì)阻止細(xì)胞凋亡的進(jìn)行。
有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。這種cell meter 活細(xì)胞半胱天冬酶1活性檢測(cè)試劑盒旨在通過測(cè)量活細(xì)胞中的caspase 1活化來檢測(cè)細(xì)胞凋亡。它用于定量凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶1活性，或用于篩選半胱天冬酶1抑制劑。綠色標(biāo)記試劑fam-yvad-fmk允許通過熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀直接檢測(cè)凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶1。該試劑盒為所有必需組分提供優(yōu)化的分析方案。
二、百螢cell meter 活細(xì)胞caspase 1結(jié)合檢測(cè)試劑盒 綠色熒光參數(shù)
ex(nm)
493
em(nm)
517
溶劑
water
存儲(chǔ)條件
在-15℃以下保存，避免光照
三、百螢cell meter 活細(xì)胞caspase 1結(jié)合檢測(cè)試劑盒 綠色熒光適用儀器
流式細(xì)胞儀
ex：
fl1通道
em:
fl1通道
儀器規(guī)格：
用于碘化丙啶的fl2通道
熒光顯微鏡
ex：
fitc通道
em：
fitc通道
通道：
黑色透明
熒光酶標(biāo)儀
ex：
490nm
em：
525nm
cutoff:
515nm
通道：
黑色透明
四、百螢cell meter 活細(xì)胞caspase 1結(jié)合檢測(cè)試劑盒 綠色熒光實(shí)驗(yàn)方案
分離細(xì)胞的檢測(cè)方案
概述
用密度為5×105到2×106個(gè)細(xì)胞/ ml的測(cè)試化合物制備細(xì)胞
將fam-yvad-fmk以1：150的比例加入到細(xì)胞溶液中
在室溫下孵育1小時(shí)
將細(xì)胞沉淀，用緩沖液或生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗滌并重懸細(xì)胞
在ex / em = 490 / 525nm處分析細(xì)胞
注：使用前將所有部件在室溫下解凍。
操作方法
1.根據(jù)您的特異性誘導(dǎo)方案，將細(xì)胞培養(yǎng)至適于細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)的密度，但不**過2 x 106個(gè)細(xì)胞/ ml。同時(shí)，對(duì)于每種標(biāo)記條件，以與誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)的陰性對(duì)照細(xì)胞群。以下是一些誘導(dǎo)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜樹堿處理jurkat細(xì)胞3小時(shí)。
2）用1μm星形孢菌素處理jurkat細(xì)胞3小時(shí)。
3）用4μg/ ml喜樹堿處理hl-60細(xì)胞4小時(shí)。
4）用1μm星形孢菌素處理hl-60細(xì)胞4小時(shí)。
注意：應(yīng)對(duì)每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，以確定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞密度。
2.通過向fam-yvad-fmk（組分a）的小瓶中加入50μldmso制備150x fam-yvad-fmk dmso儲(chǔ)備溶液。
3.將150×fam-yvad-fmk dmso儲(chǔ)備溶液（來自步驟1）以1：150的比例添加到細(xì)胞溶液中，并將細(xì)胞在37℃，5％co 2培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí)。
注1：對(duì)于fam-yvad-fmk標(biāo)記，細(xì)胞可以濃縮至~5×10 6個(gè)細(xì)胞/ ml。 未使用的150x fam-yvad-fmk dmso儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20°c。
注2：對(duì)于粘附細(xì)胞，用0.5mm edta輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用fam-yvad-fmk孵育之前用含xue清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。
注3：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。 優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。
4.將細(xì)胞以約200g旋轉(zhuǎn)5分鐘，并用1ml洗滌緩沖液（組分b）洗滌細(xì)胞兩次。 將細(xì)胞重懸于所需量的洗滌緩沖液中。
注1：fam-yvad-fmk是熒光的，因此qing除任何未結(jié)合的試劑以xiao除背景非常重要。
注2：對(duì)于分離的細(xì)胞，應(yīng)將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至每個(gè)微量滴定板孔中2-5×10 5個(gè)細(xì)胞/100μl等分試樣，用于步驟6。
5.如果需要，用dna染色標(biāo)記細(xì)胞（如用于死細(xì)胞的碘化丙錠，或用于細(xì)胞核染色的整個(gè)群體的hoechst）。
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